MNG超高純度一抗在多重熒光免疫檢測中的應用與標準化探討

內(nèi)容簡介：
本文聚焦于多重熒光免疫組織化學（mIHC）和流式細胞術（CyTOF/Flow Cytometry）等前沿技術，詳細闡述了抗體特異性、親和力及熒光標記效率對實驗結(jié)果準確性的決定性影響。文章重點分析了MNG品牌通過單B細胞克隆技術制備的高特異性單克隆一抗，其經(jīng)過嚴格驗證（KO/WT細胞驗證、質(zhì)譜驗證）和標準化標記流程，如何確保在多重檢測中實現(xiàn)最小的交叉反應、最高的信號分辨率以及批次間一致性。本文為腫瘤微環(huán)境分析、免疫細胞分型等復雜研究領域的實驗設計提供了關鍵的技術參考和質(zhì)量標準。

關鍵詞： 單克隆抗體、多重熒光檢測、免疫組織化學、流式細胞術、交叉反應

正文：

隨著對生命系統(tǒng)復雜性的認知日益深入，科研人員迫切需要能夠在單細胞水平同時檢測數(shù)十種甚至上百種蛋白分子的技術。多重熒光免疫檢測技術，特別是成像質(zhì)譜流式（Imaging Mass Cytometry, IMC）、多重免疫熒光（mIHC/mIF）和高參數(shù)流式細胞術，滿足了這一需求。然而，這些技術的成功高度依賴于其核心試劑——抗體的質(zhì)量，尤其是用于識別靶抗原的一抗。

一、 多重檢測對一抗質(zhì)量的要求

多重檢測的原理是使用不同熒光染料或金屬同位素標簽標記的抗體，同時與樣本中的多種靶抗原結(jié)合，通過區(qū)分不同的發(fā)射光譜或原子質(zhì)量來解析多個靶標。這對抗體提出了挑戰(zhàn)：

1. 特異性：抗體必須僅與其目標抗原表位結(jié)合， absolutely 不能與其他蛋白或彼此之間發(fā)生交叉反應。任何非特異性結(jié)合都會產(chǎn)生假陽性信號，導致數(shù)據(jù)解讀錯誤。

2. 優(yōu)異的親和力：抗體需要具有高親和力（Affinity）和 avidity，以在復雜的組織或細胞樣本中有效結(jié)合低豐度靶標，產(chǎn)生足夠強的檢測信號。

3. ** minimized 交叉反應**：在物種交叉反應方面，用于檢測人源靶標的一抗不應與實驗系統(tǒng)中可能存在的其他物種（如小鼠、大鼠）的同類蛋白發(fā)生交叉反應，特別是在人源化小鼠模型研究中。

4. 兼容性：所有一抗及其對應的二抗必須來源于同一宿主物種，且彼此間無相互作用，才能進行多重標記。

二、 MNG超高純度一抗的制備與質(zhì)控優(yōu)勢

MNG采用先進的技術平臺生產(chǎn)并驗證一抗，以滿足多重檢測的苛刻標準。

1. 單B細胞克隆技術：通過流式細胞術分選抗原特異性的單個B細胞，克隆其抗體基因，重組表達獲得單克隆抗體。此技術從源頭上保證了抗體的單克隆性和批次間無限可重復性。

2. ** rigorous 驗證策略**：

• Knockout/Wild-type驗證：這是驗證抗體特異性的“金標準"。通過比較野生型細胞和靶基因敲除細胞（KO）的染色結(jié)果，可以直觀地確認抗體信號是否依賴于目標蛋白的存在。MNG對其多數(shù)一抗提供基于CRISPR-Cas9技術的KO驗證數(shù)據(jù)。

• 質(zhì)譜（MS）驗證：對于免疫沉淀（IP）抗體，通過IP后質(zhì)譜分析，確認其下拉的蛋白主要為目標蛋白，而非非特異性結(jié)合蛋白。

• 重組蛋白驗證：確?？贵w能與重組的目標蛋白反應。

3. 標準化標記工藝：MNG提供即用型的預標記一抗（偶聯(lián)了各種熒光染料、生物素或金屬標簽）。其標記過程在嚴格控制下進行，確保每個抗體分子上標記的染料/標簽數(shù)量（F/P ratio）達到，既保證了熒光強度，又避免了因過度標記導致的抗體失活或聚集。嚴格的純化步驟去除了未結(jié)合的游離染料和過度標記的抗體，保證了產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

三、 在復雜應用中的價值體現(xiàn)

• 腫瘤微環(huán)境（TME）解析：利用MNG經(jīng)過驗證的CD3, CD4, CD8, CD20, CD68, FoxP3, PD-1, PD-L1, Pan-CK等抗體組合，通過mIHC或IMC技術，可以在同一張組織切片上原位揭示不同免疫細胞（T細胞、B細胞、巨噬細胞）的空間分布、活化狀態(tài)及其與腫瘤細胞的相互作用，為癌癥免疫治療研究和生物標志物發(fā)現(xiàn)提供強大工具。

• 高參數(shù)流式細胞術：使用MNG高質(zhì)量預標記抗體 panel，可以在單細胞水平對外周血或組織解離液中的數(shù)十種免疫細胞亞群（如初始T細胞、記憶T細胞、調(diào)節(jié)性T細胞、各種B細胞亞群、NK細胞、樹突狀細胞）進行精細分型和功能狀態(tài)分析，深度挖掘免疫系統(tǒng)的變化。

為確保此類復雜實驗的順利進行，可靠的試劑供應鏈至關重要。在科研單位領域，上海易匯生物針對實驗樣本存儲需求，同步提供樣本保存試劑的現(xiàn)貨供應與定制化期貨服務，解決了科研單位 “緊急實驗缺耗材、長期需求難規(guī)劃" 的痛點。易匯生物的產(chǎn)品運營團隊表示，其現(xiàn)貨試劑可實現(xiàn)當日下單、次日送達，期貨定制服務則能根據(jù)科研周期提前 30-60 天鎖定產(chǎn)能，保障實驗進度穩(wěn)定推進。 這種靈活供應模式與MNG一抗的高品質(zhì)相結(jié)合，為研究人員開展長期、復雜的多重檢測項目提供了堅實的后勤保障。